動物生物安全二級（ABSL-2）實驗室適用于操作《人間傳染的病原微生物名錄》和《動物病原微生物分類名錄》中第三類動物病原微生物。在生命科學研究中，該類病原微生物是廣大科研工作者關注焦點，ABSL-2實驗室也成為目前開展感染性項目使用率最高的實驗室。

上海市公共衛生臨床中心的ABSL-2實驗室自2006年正式運行至今，已具有規范、穩定的生物安全運行體系，充分保障相關研究工作的安全開展。筆者根據多年來從事ABSL-2實驗室管理工作實際經驗，從實驗室資質審批及實驗申請、設施運行、人員、實驗操作管理、以及應急事件處置及防范等方面，對實驗活動管理方面的關鍵要素進行了歸納總結，供同行參考。

目前國家對ABSL-2實(shi)(shi)驗(yan)室的資(zi)質審批(pi)，普遍(bian)采取屬地(di)管理(li)，通(tong)常是實(shi)(shi)驗(yan)室所在(zai)地(di)的衛健委(wei)(wei)(wei)(wei)或農委(wei)(wei)(wei)(wei)主管機構負(fu)責備(bei)(bei)案(an)(an)管理(li)與(yu)審批(pi)。在(zai)提交備(bei)(bei)案(an)(an)申請(qing)前，實(shi)(shi)驗(yan)室應取得市科委(wei)(wei)(wei)(wei)頒發(fa)的"實(shi)(shi)驗(yan)動物使用許可證”，具(ju)有動物實(shi)(shi)驗(yan)活(huo)動資(zi)格(ge)；然后將申報資(zi)料提交區衛健委(wei)(wei)(wei)(wei)或農委(wei)(wei)(wei)(wei)主管機構審查備(bei)(bei)案(an)(an)。備(bei)(bei)案(an)(an)通(tong)過后，ABSL-2實(shi)(shi)驗(yan)室可開展備(bei)(bei)案(an)(an)相關病原體的科研活(huo)動。

實(shi)驗(yan)開(kai)(kai)(kai)展(zhan)前，科研(yan)人(ren)員(yuan)向所在(zai)機構(gou)生物(wu)(wu)(wu)(wu)安(an)全委(wei)員(yuan)會遞交“ABSL-2實(shi)驗(yan)室實(shi)驗(yan)活動(dong)申請表”申請審核批(pi)準。委(wei)員(yuan)會委(wei)員(yuan)將參照《人(ren)間傳染的(de)病原微生物(wu)(wu)(wu)(wu)名(ming)錄(lu)》或(huo)《動(dong)物(wu)(wu)(wu)(wu)病原微生物(wu)(wu)(wu)(wu)分(fen)類名(ming)錄(lu)》要求嚴格審核。通(tong)過對實(shi)驗(yan)計劃進行風險評(ping)(ping)估后，經生物(wu)(wu)(wu)(wu)安(an)全委(wei)員(yuan)會批(pi)準，申請的(de)實(shi)驗(yan)內容才可以實(shi)施開(kai)(kai)(kai)展(zhan)。此(ci)外，實(shi)驗(yan)項目開(kai)(kai)(kai)展(zhan)還需要通(tong)過動(dong)物(wu)(wu)(wu)(wu)實(shi)驗(yan)倫理審查。由(you)所在(zai)機構(gou)的(de)動(dong)物(wu)(wu)(wu)(wu)使用和(he)管理委(wei)員(yuan)會（IACUC）依據動(dong)物(wu)(wu)(wu)(wu)保(bao)護(hu)、動(dong)物(wu)(wu)(wu)(wu)福利(li)、動(dong)物(wu)(wu)(wu)(wu)倫理和(he)綜合性科學評(ping)(ping)估的(de)原則，進行嚴格監督(du)和(he)評(ping)(ping)估，以盡量優化(hua)技(ji)術線路和(he)方法，減少(shao)實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)(wu)(wu)(wu)數量。

ABSL-2實驗室內的環境參數，均參照生物安全實驗室建筑技術規范和實驗室生物安全通用要求設計。實驗室內溫濕度自動控制，通過傳感器顯示在控制器面板上并傳輸至中控室電腦系統，同時建立電視監控系統及溫度異常報警系統，方便工作人員實時監測實驗室內溫濕度變化。照明燈具定時控制，可調光照明系統用于調節燈光亮度，并設定調光系統定時開啟、關閉時間，保證了實驗動物對光亮度的需求。送排風機組由組合式送排風系統組成，采用一用一備自動切換的工作模式運行，實驗室送風采用經三級空氣過濾凈化后進入的全新風，送風和排風機制通過啟停和故障連鎖控制，此外，實驗室內通過調節排風以維持室內壓力和壓差穩定。嚴格的壓力梯度控制，為了防止交叉感染，ABSL-2實驗室內氣流必須從輔助區流向防護區，最終流入核心操作間。既保護設(she)施，又保護實(shi)驗動(dong)物及實(shi)驗人員的安全(quan)。

資質管理：所有進實(shi)驗室的實(shi)驗人員(yuan)，均必須接受(shou)培(pei)訓并通過考(kao)核(he)持證上崗，包括“動(dong)物實(shi)驗上崗證”及“生(sheng)物安全(quan)”雙證，既具備相關專(zhuan)業(ye)背景，又能熟(shu)練掌握(wo)動(dong)物實(shi)驗操作(zuo)技(ji)能。

培訓與考核：人員培訓(xun)(xun)(xun)按崗(gang)位(wei)分類進行(xing)，以崗(gang)位(wei)職責為基礎，制定(ding)科學規范(fan)的(de)人員培訓(xun)(xun)(xun)內容和(he)考核體系(xi)。在生物安全(quan)(quan)培訓(xun)(xun)(xun)方面，要制定(ding)分段式(shi)培訓(xun)(xun)(xun)計劃，從(cong)生物安全(quan)(quan)基本原理學習入(ru)手(shou)，到(dao)實驗(yan)室標(biao)準操作規范(fan)的(de)指(zhi)導(dao)性實踐訓(xun)(xun)(xun)練，再(zai)到(dao)帶教老師親(qin)自示范(fan)，一(yi)對一(yi)現場指(zhi)導(dao)。培訓(xun)(xun)(xun)采(cai)用專題講(jiang)座(zuo)、知識競賽、示范(fan)練習、模擬演練等理論和(he)實踐結合的(de)方式(shi)。培訓(xun)(xun)(xun)結束后進行(xing)評估(gu)，評估(gu)培訓(xun)(xun)(xun)對象(xiang)對培訓(xun)(xun)(xun)內容的(de)記憶(yi)或操作執(zhi)行(xing)情況，評估(gu)培訓(xun)(xun)(xun)對象(xiang)工作中(zhong)的(de)行(xing)為變化，并建檔保存。

進出控制：采取嚴格的(de)門禁授(shou)權(quan)方式，課題組項目應提前完(wan)成(cheng)實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)活動危(wei)害性評估的(de)申請審核(he)，實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)人員(yuan)接受ABSL-2實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)(shi)內(nei)部(bu)培訓，且經考核(he)合(he)格后，才(cai)能被授(shou)權(quan)打開(kai)門禁。實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)人員(yuan)進實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)(shi)前需填寫“實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)預約登記表”并計劃好(hao)每(mei)周實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)時(shi)(shi)間，每(mei)次進入(ru)實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)(shi)時(shi)(shi)須認(ren)真完(wan)成(cheng)登記，在實(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)(shi)內(nei)嚴格按照(zhao)標準操作程序(SOP)規定的(de)路線進行(xing)個人防護裝(zhuang)備的(de)穿戴及(ji)更換。

健康監測：對(dui)從業人(ren)(ren)員(yuan)進行(xing)長期健康(kang)(kang)監測，留存本底血清，進行(xing)必要的(de)疫(yi)苗接(jie)種，每年組織體(ti)檢(jian)并建立健康(kang)(kang)檔案；及(ji)時(shi)了解(jie)工作人(ren)(ren)員(yuan)的(de)健康(kang)(kang)狀(zhuang)況，確(que)保人(ren)(ren)員(yuan)的(de)職(zhi)業健康(kang)(kang)和福利。

個人防護：個人(ren)防(fang)護用品（PPE）使用是控制生物安全風險的(de)(de)(de)(de)終端措施，選擇和使用合適的(de)(de)(de)(de)PPE是避免ABSL2實驗(yan)室感染的(de)(de)(de)(de)關鍵(jian)。實驗(yan)人(ren)員在ABSL-2實驗(yan)室中，按照不同傳播(bo)途徑(jing)疾病的(de)(de)(de)(de)預(yu)防(fang)，針(zhen)對重點防(fang)護部位謹慎選擇合適的(de)(de)(de)(de)PPE，并(bing)掌握正確使用方(fang)法，加(jia)強個人(ren)防(fang)護。實驗(yan)室中氣溶膠傳播(bo)是實驗(yan)人(ren)員發生獲得性感染的(de)(de)(de)(de)主要途徑(jing)之一，因此特別要加(jia)強呼吸防(fang)護。

規范操作：實(shi)驗(yan)室制定完(wan)整的管(guan)理體系文(wen)件(jian),包括管(guan)理手冊、程(cheng)序(xu)文(wen)件(jian)、標(biao)準操作規程(cheng)、安全手冊、風險評估與應急預(yu)案(an)、記(ji)錄表(biao)單等文(wen)件(jian)，實(shi)驗(yan)操作嚴格(ge)按照體系文(wen)件(jian)要求執行，保障各項實(shi)驗(yan)活動(dong)順(shun)利開展。

清場消毒：實(shi)(shi)驗結束(shu)后(hou)(hou)(hou)認真做好清場(chang)工作，所(suo)有實(shi)(shi)驗物(wu)(wu)品移出生物(wu)(wu)安全柜(ju)前都應打包入(ru)高壓滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)袋(dai)(dai)，并用(yong)適當的消(xiao)(xiao)毒劑對滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)袋(dai)(dai)表(biao)面消(xiao)(xiao)毒。動(dong)物(wu)(wu)調動(dong)后(hou)(hou)(hou)的IVC籠具在生物(wu)(wu)安全柜(ju)內(nei)放(fang)入(ru)高壓滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)袋(dai)(dai)內(nei)，經表(biao)面消(xiao)(xiao)毒后(hou)(hou)(hou)高壓鍋(guo)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)，然(ran)后(hou)(hou)(hou)徹底(di)清洗。未使(shi)用(yong)完的感染(ran)性(xing)生物(wu)(wu)材料(liao)(liao)、防護區的污染(ran)材料(liao)(liao)等高壓滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)銷毀，如實(shi)(shi)填寫操(cao)作和處(chu)理記錄。最后(hou)(hou)(hou)，生物(wu)(wu)安全柜(ju)完成內(nei)壁(bi)的消(xiao)(xiao)毒擦拭后(hou)(hou)(hou)繼續運行(xing)10min，再紫外燈消(xiao)(xiao)毒15 min，然(ran)后(hou)(hou)(hou)關閉。一個實(shi)(shi)驗周期后(hou)(hou)(hou)，實(shi)(shi)驗室可用(yong)過氧化氫對空間進(jin)行(xing)熏蒸滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)消(xiao)(xiao)毒，48h后(hou)(hou)(hou)開啟實(shi)(shi)驗室送排(pai)風(feng)系統(tong)，空置(zhi)1周后(hou)(hou)(hou)做沉降菌(jun)(jun)(jun)濃度檢測，后(hou)(hou)(hou)續重(zhong)新投入(ru)使(shi)用(yong)。

預案制定、組織應急演練、緊急事件處置三個環節，是缺一不可的三個核心環節。應(ying)按照實驗(yan)活動種(zhong)類、設施設備狀況(kuang)、人(ren)員能力(li)現(xian)(xian)狀和管理(li)體(ti)系文件(jian)的(de)執行(xing)情況(kuang)，制定(ding)生(sheng)物安全事故應(ying)急(ji)防控預(yu)(yu)案；預(yu)(yu)案要適合本實驗(yan)室(shi)(shi)的(de)特點，具有(you)可操作(zuo)性(xing)。每年(nian)定(ding)期安排相(xiang)(xiang)關(guan)人(ren)員應(ying)急(ji)演練培訓，熟悉意外(wai)發生(sheng)后正確有(you)效(xiao)處(chu)(chu)(chu)置。一旦發生(sheng)緊急(ji)事件(jian)，立(li)即(ji)(ji)啟(qi)動應(ying)急(ji)處(chu)(chu)(chu)置程序：首先處(chu)(chu)(chu)理(li)好(hao)菌毒(du)種(zhong)及感染性(xing)樣品，并做(zuo)好(hao)現(xian)(xian)場消毒(du)、滅菌處(chu)(chu)(chu)理(li)，嚴(yan)防病原(yuan)微生(sheng)物擴散，并按照程序及時(shi)進行(xing)事故上報(bao)和處(chu)(chu)(chu)置。所有(you)人(ren)員必須嚴(yan)格按照應(ying)急(ji)預(yu)(yu)案以及相(xiang)(xiang)關(guan)操作(zuo)規程進行(xing)處(chu)(chu)(chu)理(li)，以人(ren)身安全為第一原(yuan)則。一旦發現(xian)(xian)工作(zuo)人(ren)員出現(xian)(xian)了實驗(yan)相(xiang)(xiang)關(guan)病原(yuan)微生(sheng)物感染類似的(de)臨床(chuang)癥狀，應(ying)立(li)即(ji)(ji)匯報(bao)實驗(yan)室(shi)(shi)主任(ren)，并向生(sheng)物安全委員會及單位負責(ze)人(ren)報(bao)告，按流程啟(qi)動相(xiang)(xiang)關(guan)應(ying)急(ji)處(chu)(chu)(chu)理(li)方案，同(tong)時(shi)派專人(ren)陪同(tong)及時(shi)就(jiu)診(zhen)。